生 物 化 學 實 驗

 生 化 課 程 目 標
週次 授 課 內 容 備註
1 生化實驗總論
1. 實驗室安全及環境介紹
2. 實驗基本器材操作
3. 課程介紹
 
2

醣類之定性與定量
1. 利用Molish test 區分醣類
2. 利用Picric acid test區分還原醣及非還原醣
3. 利用Seliwanoff's test區分醛醣、酮醣 4. 利用Bial's test區分六碳醣及五碳醣 5. 利用anthrone reaction化學法定量醣類

1.Hot plate操作
3

蛋白定量
1.以Lowry test定量蛋白濃度
2.以Biuret test定量蛋白濃度
3.以Bradford test定量蛋白濃度

分光光度計 操作

4

Gel filtration
利用膠體過濾法分析樣品

分光光度計 操作

5

脂質過氧化之檢測
1.以Thiobarbituric acid test定量
2.比較生活中油品脂質過氧化的程度

分光光度計 操作
6

脂質過氧化之檢測
1.以Thiobarbituric acid test定量
2.比較生活中油品脂質過氧化的程度

分光光度計操作

7

酵素動力學
1.藉由Xanthine與Xanthine oxidase之反應了解酵素動力學模式

分光光度計操作

8

基因操作之原理與應用 (7-14週)
1. 講解基因操作設計大綱

 
10

質體 DNA之製備
1.小量抽取pBR322質體(4Kb)或 pGEM-T(4.5Kb)
2.洋菜膠電泳分析

洋菜膠電泳分析

11

以聚合酵素鏈鎖反應 (PCR)表現特定DNA
1.以280/260nm測定雙股螺旋及線型DNA之Tm值
2.設計Forward primer及Reverse primer
3.以PCR複製特定catalase cDNA序列

1.分光光度計操作
2.PCR操作
3.洋菜膠電泳分析
12

限制酵素切割
1.選擇BamH I及Pst I 切割pQE-31質體DNA
2.確認pGEM-T質體DNA及catalase cDNA PCR產物

 
13

DNA接合及大腸桿菌轉型
1.T4 ligase接合質體及catalase cDNA
2.利用CaCl 2 化學法進行E.coli轉型

 
14

1.蛋白質之誘導表現
a. 利用質體構築之特殊基因進行大量catalase蛋白表現(IPTG)
b. 收集不同時間(1-4小時)表現之catalase蛋白
2. SDS-PAGE及西方墨漬法之原理應用(3:30-5:00pm介紹)

 
15

利用 SDS-PAGE檢測蛋白之表現(直接進實驗室)
1.利用電泳膠體法分離catalase蛋白
2.利用SDS-PAGE定性及定量catalase蛋白

 
16 利用西方墨漬法偵測特定蛋白之表現 (直接進實驗室)
1.了解利用Ab及Ag之間的結合法,偵測特定catalase蛋白
 

回課程改革